Chromatographie FPLC

La chromatographie FPLC (Fast protein liquid chromatography) est une forme de chromatographie liquide souvent utilisée pour analyser ou purifier des mélanges de protéines. Comme dans d’autres formes de chromatographie, la séparation est possible parce que les différents composants d’un mélange ont des affinités différentes pour deux matériaux, un fluide en mouvement (la phase mobile) et un solide poreux (la phase stationnaire). Dans la FPLC, la phase mobile est une solution aqueuse, ou “tampon”, dont le débit est contrôlé par une pompe volumétrique et est normalement maintenu constant, tandis que la composition du tampon peut être modifiée en prélevant des fluides en différentes proportions dans deux ou plusieurs réservoirs externes. La phase stationnaire est une résine composée de billes, généralement d’agarose réticulé, emballées dans une colonne cylindrique en verre ou en plastique. Les résines FPLC sont disponibles dans une large gamme de tailles de billes et de ligands de surface en fonction de l’application. La FPLC n’est généralement appliquée qu’aux protéines ; cependant, en raison du large choix de résines et de tampons, elle a de nombreuses applications. Contrairement à la HPLC, la pression du tampon utilisé est relativement faible, généralement inférieure à 5 bars, mais le débit est relativement élevé, généralement de 1 à 5 ml/min. La FPLC peut être facilement mise à l’échelle, de l’analyse de milligrammes de mélanges dans des colonnes d’un volume total de 5 ml ou moins à la production industrielle de kilogrammes de protéines purifiées dans des colonnes de plusieurs litres. Lorsqu’elle est utilisée pour l’analyse de mélanges, l’éluant est généralement recueilli en fractions de 1 à 5 ml qui peuvent être analysées ultérieurement.